为保证临床检验质量,必须进行全过程质量控制和质量管理。其中包括:实验前、实验中和实验后三个阶段的质量控制。而实验分析前的质量控制是全面质量控制的前提。有研究表明检验结果误差中70%左右来自标本的质量,而且分析前误差是仪器、试剂、质控品和标准品等再好也无法解决的。因此,必须做好分析前质量控制。
一、患者和标本采集者的准备
标本采集的类型依所分析的物质而定。标本采集前患者的状态和医护人员的医疗活动对检测结果有一定的影响。许多非疾病因素,如是否空腹、精神状况、体力活动、使用药物、输注液体、溶血、脂血、胆红素血等都可能影响检验结果,导致分析结果与被测物真实浓度不符。
1.血样采集时间
个体的血液成分在1天内的不规则的变化必须与个体的生理节律相鉴别。后者是24h内有规律的反复出现的特定现象。时区改变时,常常出现生物节律的改变,如穿越经线,机体需要6-8h去适应新的时区。并不是所有的人都出现昼夜节律和生物节律的改变(如在早晨常有几分钟的皮质醇的改变)或血液成分在较长时间内发生变动。
在每日的不同时间,铁浓度都有明显的变化,在下午的变化最大。而皮质醇、肾上腺素和去甲肾上腺素在早晨的变化最大,肾素、醛固酮、生长激素和甲状旁腺素在晚上的变化最大。皮质醇在晨8点左右皮质醇值达到峰值,随后逐渐降低,午夜最低,因此上下午所测定之值可能会有明显差异,最好于上下午各采血一次。醛固酮检测要在起床活动前取卧位血,起床后活动2h取立位血。促甲状腺素在每日不同时辰,其浓度也会出现若干变化。
2.姿势
从仰卧位到直立位的过程中,大约8%的体内水由血管进入间质组织中,而血液中细胞、蛋白、蛋白结合物等成分不能通过血管壁转移,使其血浆含量升高5%-10%。人体直立、手臂下垂时的血液浓度比保持手臂于心房水平要高。故患者直立位或坐位抽血测得的蛋白质、蛋白质结合物、细胞比至少让患者仰卧10分钟后抽血所测定的结果要高3%-8%。对于一些参数,由上述原因所导致的影响要比分析不精确的影响还要大,例如血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数、红细胞压积、总蛋白、胆固醇、白细胞、免疫球蛋白和钙离子。这种改变在有水肿的患者比在健康人中明显。由于体内循环的改变,由仰卧位到直立位可以导致去甲肾上腺素、醛固酮和肾素水平升高2倍以上。
测血中儿茶酚胺时,采血前一周,应避免抽烟,食用如核桃、香蕉及肾上腺素类药物,保持平静勿使其受压力、兴奋等情绪变化,仰卧30分钟后抽血。
3.静脉加压的持续时间
静脉加压和体位从水平位变为直立位有相同的效应,使所有的高分子物质增高,如乳酸升高、pH值降低,钾离子、钙离子、肌酸激酶升高等。如10分钟的加压时间可使总蛋白升高20%。对水肿患者的手臂加压,血液浓度的问题相当突出。
压迫时间过长,产生静脉淤血,pH降低。低氧效应迫使钾离开细胞,引起血清钾水平假性升高。如果要求患者反复握拳,以显示静脉,这种效应可能加重。在反复握拳时,前臂肌肉收缩,引起钾释放,因为在肌肉细胞去极化时,细胞负电性降低,它有助于钾释放。在扎止血带后放血时,反复握紧拳头。可引起钾增高1-2 mmol/L;也可引起纤溶活性增强,血小板释放及某些凝血因子活性增强,影响实验结果。应用止血带达到2 min时,可以引起血中胆固醇水平增加5%,如果止血带遗留5 min,它可增加10-15%。
建议采集静脉血时,止血带压迫时间最长不超过1分钟。
4.最后一次进食
进食可引起血中葡萄糖、磷酸盐和胆红素、乳酸脱氢酶、总蛋白的增加,丙氨酸氨基转移酶和钾离子明显升高,尿酸、蛋白质、钙离子、胆固醇轻到中度增高。餐后立即抽血,造成混浊的血清,干扰多种以免疫学反应为基础的检测,如各种病毒抗体、免疫球蛋白等。脂肪摄入的程度决定了甘油三脂的水平。高蛋白饮食者,其血尿素氮、尿酸高;而高嘌呤食物影响的当然就是尿酸增高。在以诊断为目的时,低脂肪的简单早餐对许多血液成分浓度无明显影响,而另一方面,如果要评估脂肪代谢,就必须坚持12h禁食;葡萄糖耐量试验前,要求连续几天摄入高碳水化合物。空腹时间也不宜太长,空腹超过48h可能会造成胆红素两倍以上的增加。而葡萄糖、白蛋白、补体C3及转铁蛋白下降。
建议最后一次食物和液体(白开水除外)摄入应在前一天晚上7点以前(急诊检验例外),使静脉采血前至少空腹12h。并采集应在不服药期间,如在早晨服药前。
5.运动
经过几小时的运动,尤其是对未经训练过的个体,由于体力所致的细胞损伤导致肌肉组织中的酶如天门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酐、尿素氮、尿酸、白细胞、钾离子、胆红素、乳酸、高密度脂蛋白胆固醇的浓度升高。运动员的乳酸脱氢酶、尿素氮较高。长期的运动促使高密度脂蛋白、乳酸等升高。
卧床休息使肾脏排泄钠、钙、氯化物、磷酸盐和氨增加,碱性磷酸酶的血浆水平升高。
6.溶血
长时间过度的加压可使血管内溶血,用注射器采血时用力过大或不正确的穿刺吸入静脉周围血导致血管外溶血。如血红蛋白浓度超过0.2g/L肉眼可见到溶血。红细胞膜完整性被破坏会严重影响实验结果的项目主要有:乳酸脱氢酶、钾离子、胰岛素,前二者升高而胰岛素降低;有值得注意的影响的项目主要有:碱性磷酸酶、胆红素、天门冬氨酸氨基转移酶、酸性磷酸酶、肌酸激酶、r-谷氨酰基转移酶、肌酸激酶同工酶、丙氨酸氨基转移酶、甲状腺素;有轻微影响或不太受影响的项目主要有:铁离子、凝血因子、总蛋白、白蛋白、白细胞、活化部分凝血活酶、凝血酶时间、肌酐、尿素、尿酸、磷、镁离子、钙离子、血红蛋白。在交叉配血中,血样溶血严重干扰对结果的判断。
7.采血
采血时要避开水肿、破损部位,应“一针见血”,防止组织损伤,外源性凝血因子进入针管;如果采血过慢或不顺利,可能激活凝血系统,使凝血因子活性增高,血小板假性减低。切忌在同一处反复穿刺,易导致标本溶血或有小凝块,影响检验结果。
8.输液
8.1.采集静脉血不得从静脉注射处、套管处取血,绝不能在输液时从同侧上肢近心端抽血,及从临近输液的位置采血,应从对侧手臂采血。输液不仅使血液稀释,而且对实验室检查结果发生严重干扰,特别是血糖和电解质。从留置管内取血,其管内的抗凝剂会严重影响检验结果。
8.2.接受脂肪乳输注的患者,必须在8h后方可采血。
8.3.接受富含碳水化合物溶液或氨基酸及蛋白水解物或电解质输注的患者,必须等输液停止后1h方可采血。
8.4.接受输血的患者,溶血程度以及随溶血所致钾、乳酸脱氢酶和游离血红蛋白值的增加,同所输血液老化程度有关。
9.样本处置
静脉血采集过久未分离血清或血浆,会出现以下情况:
9.1.由于血细胞的酵解作用,血糖以每小时5%-15%的速率降低,即使在真空采血管中在较低温度下每小时也会降低1.9%,糖酵解产物乳酸和丙酮酸升高。
9.2.由于红细胞膜通透性增加和溶血加重,红细胞内化学成分发生转移和释放,酶活性受影响,血清无机磷、钾、铁、乳酸脱氢酶、天冬氨酸转移酶(可能)、肌酸激酶等升高。
9. 3.由于酯酶作用,胆固醇酯因分解减少,游离脂肪酸增加。
9.4.酸性磷酸酶测定血标本室温放置l-2h测定结果降低(可能)。
9.5.不论是抗凝血还是非抗凝血,为了缩短血清或血浆与血细胞的接触时间,血液标本收集后,一般要求在2h内,或尽可能早些将标本送至检验科,以便尽快将血清或血浆从全血中分离出来,避免由此而影响检验结果的准确性。
9.6.运送人员必须保证运送后的标本所分析的结果与刚采集标本后分析的结果一致。有特殊要求的标本要按特殊要求运送:如血气分析标本应严格密封,与外界空气隔绝;日晒可导致白细胞、血小板、血沉偏高,胆红素偏低,对于测定vitA、vitBl2、B-胡萝卜素、胆红素等标本,应注意避免暴露于光线下,用黑纸或铝箔保护标本。
9.7.必须采用真空管采血,管塞不能拔掉,否则会使pH升高,pH的改变又会使血液中许多其他成分发生变化,如可使钙离子增高、酸性磷酸酶减低等。密闭可以减少污染、蒸发、喷溅和溢出等。
9.8.微血管穿刺样本用于血细胞分析、电解质及一般生化检验,有可能挤入组织液造成不准确的结果。
10.饮酒
饮酒几分钟后,天门冬氨酸氨基转移酶会轻度升高,3h后达到最大,但仍在不饮酒的参考范围内。一段时间后,r-谷氨酰基转移酶轻度增高,对别的酶的影响很难检测到。饮酒后,甚至是少量的饮酒后,在一些个体中可以检测到甘油三脂持续几个小时或几天的大量增高。慢性饮酒可显示持续性的r-谷氨酰基转移酶水平升高。酒精可导致检验结果立即上升的有:尿酸、乳酸;嗜酒者的影响有:r-谷氨酰基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、甘油三酯,成隐者甚至影响其它如胆红素、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶。
11.紧张
导致儿茶酚胺和17-羟皮质类甾醇的产生增加,皮质醇、肾素、醛固酮和生长激素的血浆水平升高,促甲状腺素和催乳素的血浆水平也可能增加,情绪紧张会使血糖升高。
12.医疗处置
12.1.通常,外科手术后的第一个24h内会发生下列改变:血红蛋白浓度下降、白细胞增多,红细胞沉降率升高,c反应蛋白等急性时相蛋白增加、暂时性的中度高胆红素血症和尿素升高。肌酸激酶水平明显升高,尤其是在腹部或胸腔手术时,其水平在最高参考值的3-10倍,胆囊切除术后,经常可见到中度转氨酶的升高。
12.2.电离辐射治疗,可由于肿瘤组织的溶解,常导致血小板和白细胞的下降,尿酸升高。
12.3.采血样之前按摩前列腺可引起酸性磷酸酶升高。
12.4.因此,在标本采集前,要根据需要对患者做好相应的准备。一般要求患者仰卧位,处于安静状态;晨起时的精神、体力、情绪等因素的影响较小,早晨7点到8点是大部分标本采集的最佳时间;如可能,患者最好停服干扰检测的药物;根据项目和标本类别选择相应的容器。血样要求在每一天的同时间采集,尤其是以监测为目的时,更要保证标本采集时间的统一。
二、影响结果的生物因素
可引起所检测物质在体内的变化,此种变化与检测方法无关,分为可变的因素和固定的生物因素。可变的生物因素包括营养、体重、肌肉重量、气候、身高等。固定的生物因素包括性别、年龄、种族和遗传因素。
1.性别
许多实验室检测都列出了不同性别的参考值。对一些被测物,性别间的差异可能是由于体重、体表面积和肌肉重量的不同而导致的。下列试验在男性中所测得的结果比在女性中所测得的高:谷氨酰转肽酶、甘油三脂。尿酸、肌酐、氨、肌酸激酶、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、铁、尿素、胆固醇。
2.种族
就酶的参考值来说,种族不会导致明显的差异。就某些物质如胆固醇、甘油三酯、尿酸来说,不同社会经济阶层的饮食习惯不同所导致的差异要比种族不同所导致的差异大。在血型的频率分别上,种族差异起着重要的作用,同样,种族差异在一些血浆蛋白表型和它们蛋白质浓度的关系中也起一定的作用,如结合珠蛋白和α1一抗胰蛋白酶。
3.年龄和老化
随着年龄增加,钙、磷酸盐、总蛋白和白蛋白水平下降,而葡萄糖、尿素、胆固醇的浓度和乳酸脱氢酶活性增高。单克隆丙种球蛋白发病率上升和肌酸清除率的下降都是与年龄相关的改变。肌酸、碱性磷酸酶、谷氨酰转肽酶的升高和男性中年龄相关性尿酸的增高仍没有被明确的证实。与成人相比,儿童期的酶活性较高,而铁、铜和免疫球蛋白的浓度较低。
4.体重
肥胖的男性有较高浓度的尿酸、胆固醇、乳酸脱氢酶、胰岛素、餐后葡萄糖、天门冬氨酸氨基转移酶、肌酐、总蛋白和尿酸。磷酸盐在男性和女性肥胖者中较低,而钙离子只在女性肥胖者中较低。肥胖人士除了血糖、总胆固醇、尿酸普遍偏高外,肥胖男性尚会有肌酐、总蛋白、天门冬氨酸氨基转,移酶偏高及磷偏低的现象,而肥胖女性则有钙偏低的情形。
5.怀孕
碱性磷酸酶、胆固醇、甘油三脂、铜、血浆铜蓝蛋白、运铁蛋白、白细胞计数、孕酮、雌二醇、雌三醇和催乳素升高。随怀孕而上升的人绒毛膜促性腺激素和甲胎蛋白。铁、镁、总蛋白、白蛋白、胆碱酯酶、血红蛋白、红细胞压积和红细胞计数下降。怀孕造成甲胎蛋白、淀粉酶、胆固醇、甘油三脂偏高,尿素氮、钠离子、白蛋白偏低。
三、影响结果的药物因素
药物对生理病理过程可产生直接或间接的影响。如甲状腺素类制剂治疗黏液性水肿等甲状腺功能减退症时,也能促进糖的吸收,增加糖原分解及糖异生作用;还可加速胆固醇转变为胆汁酸由粪便排出。因此,可造成血糖增高和胆固醇降低。一些药物的毒副作用,如肿瘤化疗类药物对造血功能、肝肾功能造成的影响或损害,引起相关指标的改变。
刺激性食物和成瘾性药物通过各种复杂机制对人体产生多种影响,表现为多种实验室指标的升高或降低。比如咖啡因可使血糖、儿茶酚胺等升高;烟草的有效成分一氧化碳结合血红蛋白的增高进而使血红蛋白检测结果增高;酒精可使乳酸、尿酸升高,血糖降低等。因此,医生应嘱咐患者采血前4h勿喝茶或咖啡、勿吸烟饮酒。尽量了解患者对刺激物(烟、酒、茶或咖啡)和成瘾性药物的接触史,供评价检验结果时参考。
对测定方法产生的影响有些是物理性的,如药物的颜色影响比色法的测定;有的药物参与化学反应,最典型的例子就是服用维生素c后检查尿液时,虽然显微镜下可见红细胞,但化学分析时隐血试验却为阴性,有些药物可抑制酶的活性,造成酶活性测定结果的降低。所有药物都会对患者的某些检验项目的结果产生或大或小的影响,为减少药物的干扰,做某种检验时应暂时停用对结果可能产生影响的药物,如不能停用,则解释结果时要将可能的影响考虑在内。
1.常用药物对结果的影响
1.1.抗生素
青霉素类和磺胺类药物能增高血液中尿酸浓度,常误报作“痛风阳性”。磺胺类抑制肠内细菌繁殖,使尿胆素不能还原为尿胆原,无法得出尿胆原的正确结果。微生物培养最好在使用抗生素之前。
1.2.镇痛消炎药物
阿司匹林、氨基比林等会使尿中胆红素检测值升高;吗啡、度冷丁和消炎痛、布洛芬、可卡因等,可导致检验中淀粉酶和脂肪酶含量明显升高,在用药后4h内影响最大,24h后消失。
1.3.抗癌药物
绝大多数抗癌药物对人体造血系统有抑制和毒害作用,可导致血液中红细胞、白细胞、血小板和血红蛋白数量的减少(少数药物可使血细胞异常升高),肝功能改变,有的使血脂值升高。其中甲氨蝶呤抑制骨髓,且损害肾功能;硫唑嘌呤损害肝功能,出现黄疸:阿糖胞苷使谷丙、谷草转氨酶异常升高。
1.4.激素类药物
雌激素类药物能影响人体中血脂的正常含量,使葡萄糖耐量试验减低,并可引起血小板和红细胞量的减少。盐皮质激素易导致水、钠潴留和低钾血症、肾上腺素减少钙、磷的吸收,且排出量增加,故血钙、血磷偏低,另外可明显升高血糖。
1.5.利尿药物
临床上常用的为双氢克尿噻、速尿、三氯噻嗪和利尿酸等,典型的临床反应为:低血钾、低血容量和低血氯,长期应用后可见高氮质血症和高尿酸血症。
1.6.抗糖尿病药物
众所周知,使用胰岛素后可出现低血糖症。其它抗糖尿病药如D60、氯磺丙脲等,可损害肝功能,使谷丙、谷草转氨酶升高,出现黄疸、血细胞减少等。
1.7.抗癫痫药
如苯妥英钠因抑制叶酸的吸收,常见巨细胞性贫血,因轻度抑制骨髓,故使血细胞(尤其是白细胞和血小板)减少,偶有再生障碍性贫血的报道;卡马西平可致粒细胞、血小板减少,长期应用损害肝功能。
1.8.口服避孕药
口服避孕药使可影响的检验报告据称有100多项。服用口服避孕药后,血清中酶在一定周期内升高,然后降低,任何升高都保持在正常值范围内。甲状腺素结合球蛋白和血浆铜蓝蛋白在女性分别升高44%和70%。甲状腺素、甲状腺结合球蛋白、丙氨酸氨基转移酶、铁离子、谷氨酰转肽酶升高,白蛋白低等。
1.9.肌肉注射类药物
如苯二氮卓类、杜冷丁、喷他左辛、氯丙嗪、利多卡因、苯巴比妥、异丙嗪,可引起肌酸激酶和肌红蛋白的升高。应用多肽类药物治疗的患者,血液中的多肽会排入尿,可导致尿蛋白假性升高。
1.10.使检验标本着色的药物
主要为药物使尿液染色,从而干扰比色测定和荧光分析的测定结果。如服利福平后尿呈橙红色;服维生素B2、黄连素等使尿呈黄色;服苯琥珀后尿呈桔红色;服氨苯蝶啶后使尿呈绿蓝色,并有蓝色荧光。许多药物对大便的色泽也可产生影响。
为了最大限度地避免和清除“药物干扰”影响检测结果,临床医师、检验医师和药师应紧密配合,结合不同给药途径给药后的药物代谢动力学,判定检验结果时要综合考虑给药途径、药物的血药浓度水平,药物的半衰期、排泄途径和清除率等。许多药物对检验结果的干扰,常与血药浓度呈正相关。故检验采集样品应尽量避开血药高峰期。当疾病条件许可时,应提前停药,以完全排除药物对检测的影响。